ELISA Indirecto

Enzyme linked immuno sorbent assay

Repaso

  • La técnica de ELISA se encuentra incluida en reacciones de interacción primaria en la clasificación vista en la clase. ¿Por qué?

Consideraciones Generales del ELISA

  • El fundamento consiste en evidenciar la presencia de un antígeno (Ag) o un anticuerpo (Ac) presente en una muestra problema.
  • Este Ag o Ac se une a otro Ag/Ac (según corresponda) que se encuentra unido a una enzima.
  • Las enzimas son capaces de modificar a un sustrato en presencia de un cromógeno, produciendo un producto coloreado que es detectado visualmente, o por un espectrofotómetro.

ELISA Indirecto

Como toda técnica indirecta, se utiliza para detectar la presencia de anticuerpos presentes en una muestra de suero.

Fase sólida

La fase sólida está compuesta de microplacas con fondo plano de poliestireno o polivinilo debido a que presentan gran afinidad por las proteínas, requieren menor cantidad de reactivos y son aptos para la automatización.

Paso 1 - Adsorción

Se fija el antígeno a investigar a la fase sólida.

Se lava y luego se bloquea los espacios donde no se unió el antígeno con una proteína inerte.

Cuestionario 1:

  1. ¿Qué tipos de antígenos se pueden usar?
  2. ¿Qué tipo de proteína inerte se puede utilizar?

Paso 2 - Muestra

Se agrega la muestra problema.

Si en la muestra están presentes Ac dirigidos contra el Ag, estos se unirán.

Luego se lava para eliminar los anticuerpos no específicos.

Cuestionario 2:


  1. ¿Se podría usar otro tipo de muestras que no fuera suero?
  2. ¿Qué sucedería si en el suero no están presentes los Ac específicos?

Paso 3 - Adición del Conjugado

Posteriormente, se agrega una anti-gammaglobulina (IgGh) humana.

Este Ac conocido con el nombre de conjugado, tiene adosado una enzima.

Luego se lava para separar lo libre de lo unido.

Cuestionario 3:

  1. ¿Cómo puede obtenerse la IgGh?
  2. ¿Que tipos de enzimas pueden adosarse?

Paso 4 - Adición del Cromógeno - Sustrato

Luego, se adiciona un sustrato, que mediante una reacción química modificará la estructura del cromógeno.

Como resultado final, se desarrolla color que puede ser visualizado o medido mediante el espectrofotómetro.

Cuestionario 4:


  1. ¿Comó será el color respecto a la presencia de Ac. presentes en el suero?
  2. ¿Qué tipo de técnica pude realizarse? ¿Cuali o cuantitativa? ¿Cuáles serían las consideraciones a tener en cuenta?
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) - Multi-Lingual Captions